Bernstorff Slotshave er anlagt med en bred, gennemgående hovedakse fra 1765 efter plan af Nicolas-Henri Jardin. Midt i 1800-tallet forstærkede slotsgartner Rudolph Rothe havens udtryk som et stykke sjællandsk natur med store, græsklædte sletter omgivet af bøge- og egeskov. Svenske Villa, der blev opført til Den Nordiske Industri-, Landbrugs- og Kunstudstilling i 1888, blev efter forslag fra dronning Louise flyttet til slotsparken og er i dag et kulturhus drevet af frivillige. I år 2000 genskabtes Dronning Louises Rosenhave ved tehuset, ligesom frugthaven med bl.a. espalierede frugttræer er genplantet.
I Bernstorff Slotshaves moser vokser sjældne arter som kærstorkenæb, blågrøn og grå løvefod samt star som bleg, blågrøn, grøn og hirsestar, og i et vandhul i slotshaven har udsatte bjergsalamandere etableret en bestand.